行业动态
1跑page胶的时分，小电压跑会防止高电压发生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些，且别离作用更高，有利于分子量相差不大的蛋白别离。
2. 提取质粒的时分，最终一步的酒精蒸腾很要害，底子上是其后续的酶切反响的决议性要素。所以这一步尽量蒸腾长一点时刻，最好是空调吹热风，或是37度温箱放长一点的时刻，我试过室温过夜，酶切很好。
3. 做WESTERN BLOT 的时分，咱们往往会探究一抗、二抗的浓度，关闭时刻，曝光时刻等等，而每次改换其间的一个条件就需求从头跑胶、转膜，乃至从头提蛋白，这样会糟蹋许多的时刻。其实彻底没有必要这样。一次转膜后，将PVDF膜晒干，削减成小块，保存起来，用的时分取出一块，没有任何影响。这关于探究条件的战友来说，节省了许多的时刻。
1）将缓冲液配方中的成别离离以10－100倍配成母液贮存，需求的时分只需将相应的母液混合，补加水稀释即可
2）配培育基时一般会忘掉各成分的量，如配LB时的三个成分不记得究竟哪个是5g，哪个要10个，因而能够在常用的试剂瓶的标签上注明所需的量，如配LB时，在NaCl瓶外注明10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等，很便利，不需求每次配之前暂时翻书
在做克隆判定的时分常常需求在酶切判定前进行PCR判定，每次装备PCR反响液很繁琐，能够将其装备相似kit的方式，按你需求的反响系统列表，然后扩大100倍装备100×主反响液（100次反响），其间含buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和Taq酶，然后能够10×分装或一管贮存在－20度，在需求的时分拿出融开，然后按所需的PCR反响个数罗致相应的倍数，再补加相应反响倍数的Taq和引物，混匀后分装，这样做的长处如下：
在做酶切时，也能够象PCR相同装备主反响液，每次反响前先列好反响的系统，算好需求的反响数，然后按所需反响的系统按所需反响数扩大，参与buffer、酶、水，质粒栏空缺，然后混合后按除质粒DNA的体积分装，然后再在每管中参与相应体积的质粒DNA酶切，这样做的长处如下，特别是当一同有10几个阳性克隆需求判守时尤为显着：
1）可将SDS－PAGE的积层胶，别离胶预先配好大体积如100ml贮存在4度冰箱（注：10％AP，TEMED不加，牢记！！！），每次装备时只需罗致相应体积的预制胶参与AP，TEMED即可，没必要每次制胶时分翻分子克隆，特别便利，并且，这样的预制胶可贮存半年以上，不失为偷闲的绝佳办法；更要害的是可大大削减与丙稀酰胺的触摸，因而大大削减中毒的时机。
2）电泳时尽管小电泳别离作用要好一些，但2小时以上的等候的时刻真实是苦楚，因而能够进步电泳至150V，但需求将整个电泳槽放在放满冰水的脸盆里散热，这样跑出来的胶别离作用一点点不比低电压来的差，要害是时刻大大节省，不需1h即可看成果了
8. 实验中小诀窍我想能够分红两类：一类是“非惯例”操作；一类是惯例操作过程中一些省时省劲手法。
前一类，我举个比方：有时分第一天涂的转化平板、次日早晨转化子或许长成的菌落比较大（1~2毫米以上，BL21就长得快），下一步转化子做质粒判定。这个情况下能够直接挑取一块菌苔（勿带出培育基），50微升酚/氯仿悬浮菌体，放置两分钟，加40微升TE抽提，上层TE吸出后再氯仿抽提一次，罗致上层TE便是质粒提取液。提取的质粒能够直接用于电泳和酶切。这样操作，能够省去转接液体试管的培育过程，至少节省6~8小时的时刻。可是，要在各过程都操控得很好的情况下才干确保提取和酶切的作用，不同的实验室或许操作者未必能够很便利地重复----其实，其它的一些“小诀窍”也是如此。
后一类的小诀窍则在实验室中无处不在。如：平行作不同样本的PCR,模板DNA加量相同，装备PCR系统能够一同制作后分装----这点做过实验的都知道，可是制作的时分制作量能够比预期分装量稍多一点（如用100微升则配110微升），这样能够防止有时分分装不可的为难，由于不同特别是巨细不同的枪，会有差错。再比方：楼上有站友说的sds-page胶预配（APS和TEMED、或许后者先不加）的问题，实际上时刻放置过长必定影响作用，假如要在一天内接连地跑两次板，何尝不可？又比方，配sds-page胶的时分，上层胶和基层胶能够只用一个大枪头：先取胶，次取水，取6.8的tris后再取8.8的tris，省时省料。
20021108站友开的这个帖子很好，在上上层楼的帖子说得也有道理。但我想，“诀窍”和“偷闲”不该该是因果关系。其实，不管是那一类的小诀窍，都是在充沛地了解实验各过程的原理、经过屡次实验堆集、再加上一点点思索然后测验的成果。知其然知其所以然和勤于思考勇于探究，是根柢。否则，他人的小诀窍对你也未必能够有用。才进实验室的新手，务必要先练好标准厚实的操作，然后才干弄“诀窍”。舍本求末，贻害无穷。
9. 我一贯是把SDS－PAGE的积层胶，别离胶预先配成mixture，APS制胶时参与，半年内运用，必定没有问题，我确保。
10. 做SDS-PAGE的时分，除了蛋白量上样共同，最好体积也共同，这样跑出来的胶各个泳道之间的band能做到相同宽，便利后边的比较，特别是WB。做法便是拿1X的上样缓冲补全要加的样做到体积共同，否则跑出来会有的宽有的窄，特别是上样体积相差较大的。
11. 在把蛋白胶做成干胶时，许多时分会由于有气泡使胶裂掉，我的经历是在做胶时加上层膜前在胶上多加些水就不简略进气泡了，还有便是高温烘胶，我喜爱放到60度烘箱里烘，这样水分蒸腾速度快，即便有一些小的气泡也不会有影响，呵呵，这是经历之谈，我历来都没失手过，咱们能够试试
12. 做大肠表达时确认蛋白是否表达一般要煮样做诱前诱后检测,但许多时分煮出来的很黏影响跑胶作用.我发现假如现用8M Urea重悬细菌再煮作用会有极大改进.
1 做SDS-PAGE跑胶一般都是现配现用,但配胶要1h,所以假如想第二天睡个懒觉而又不耽搁跑胶能够于前一天晚上做好浓缩胶和别离胶,待凝集后不要拔下梳子,把含胶玻璃板从制胶槽取下,用保鲜膜包上,留心玻璃板上下两边际会有气体,所以需求加一点电泳缓冲液以防止胶内水分蒸腾.然后放4度过夜.第二天直接拔下梳子行后续.国外许多公司出售脚既是如此,能够保存上星期.
2 装备别离胶或许非变性胶时因胶凝时缩短可导致加样孔变浅.能够将加剩的胶放入4度以下降凝集速度,而将凝胶放入37度促聚,并随时用4度加剩的胶弥补下降的胶面.别的将胶横放与水平面成~10度角也能够削减缩短的影响.
一同跑2块胶,一同转膜,然后两块膜背靠背放入同一封口膜一同关闭,一同一抗二抗(最好是用转轮,这样作用好.假如是摇床,隔一段时刻帮它们翻个身以确保两张膜的正面都有时机与液体充沛触摸.一同洗膜(能够略微加强洗膜也能够不做.我最多一张盘子里放4张膜而没有影响洗膜).可别离或一同压片.这样就能够节省一半抗体和挨近一半时刻而不会影响成果.
或许别的一个便是孵育后的抗体不要扔,好的抗体能够重复做好几张膜呢.但每次都会削弱,作用不如上面一种办法.
14.做western blotting 转膜时，胶放在转膜缓冲液中一段时刻，待胶在含有甲醇的缓冲夜中缩小的差不多后装好转膜设备，我的经历是把膜印在胶上直接在膜上画出预染maker条带，便利的很。由于许多时分跑电泳时胶上的预染maker很清楚，等转膜后就不是分辩的很清楚了。不过要留心画好预染maker后就不要使胶和膜发生对位移动了，以防maker失掉参照价值。
15. 超滤最适宜用于蛋白的浓缩，替换缓冲液和除盐，关于依照分子量进行初别离的作用不是很好，理论和现实是有很大不同的^_^
1）用具的清洁十分重要，开端做前，为了安全，特别是装胶的厚薄玻璃板，能够先用中性洗刷剂和自来水重复冲刷，确保无洗刷残液后用蒸馏水冲刷2－3遍，然后用去离子水冲刷一遍。最终用95％酒精再擦一遍后晒干备用。
2）配胶最好现用现配，先配基层胶（别离胶），后配上层胶（浓缩胶或积层胶），并且在临灌胶前加APS并敏捷混匀，即用移液枪抽吸与注入1－2次即可。
17跑蛋白page的时分，一开端用加样针，太费事，发现用20ul枪+一般小白枪头点，十分省劲。别的，点样时有或许看不清孔在哪，看远离你的那面胶，孔有反光的。点样也点你对面的那块胶，省的总垂头，干咱这行的简略得颈椎呀，珍惜自己。
18. 笔直电泳时，可在电泳糟中放入青霉素小瓶等，可天然使液面进步而不影响电泳，又很节省电泳缓冲液。
19. 咱们有时要沉积东西时，由于沉积量很少，离心完之后不知道究竟有没沉积下来东西，由于量很少，欠好调查，所以离心时主张按特定的方向放置离心管，这样你就能够在离心之前确认沉积该沉积到管子的大致部位，这样离心后就可直接调查那有没有沉积，防止满管子找，别的看沉积时能够对光看，这样便是颗粒状的细微沉积也能看见的。
20. 咱们都知道PMSF有剧毒，从前都是知道浓度和要配的体积的基础上,算出要称多少毫克的PMSF,其实也能够先称PMSF,称多少算多少,再调整异丙醇的体积，抵达你所要的浓度。这样就防止了你长时刻和它触摸。
1. 清洗好玻璃板，不要偷闲，许多时分跑完电泳撬胶时会由于玻璃板不洁净胶粘在板上把胶撬破。
2. 配胶时不要重复用枪混，略微摇混就能够了，用枪混屡次会导致胶凝欠好影响电泳图的分辩率。
4. 倒胶时把玻璃板中的水用滤纸尽量吸干，由于微量的水存在会影响配的胶浓度。
6. 电泳完撬胶时根柢不需求用撬胶板，在一平皿里装好水，把有胶一面的放在水中晃动几回胶很简略就掉落下来，一点没有问题，便利的很。
7. 点样时样品别忘了离心这步，由于上样含有固体沉积会影响电泳图分辩作用。
１．一贯电泳时，盐离子简略聚在胶槽的两边．剪一小段ＩＰＧ胶条放在两边，构成盐桥，电压就简略上去了．防止一贯电泳欠好影响最终实验成果．
２． SDS－PAGE时,在灌胶之前,一般咱们都会用凡士林封底, 在SDS－PAGE
电泳之前又有必要把凡士林搽洁净,很是费事,我的经历是:不必凡士林,取少数未加Ap的别离胶,按份额加2倍量的Ap,然后灌入板间,等上几分钟,待胶凝结后就能够接着灌别离胶了.方面,作用好!
23.蛋白质纯化时，蛋白质降解或许与超声破菌坚持冰浴有关，之前主张加pmsf，主张在上柱子洗脱的时分也加pmsf（蛋白降解抑制剂），必定要用之前再加。
24. 做透析的时分，拿一个5ml的枪头或许是其他相似的东西，剪短，穿过个塑料泡沫之类的面积比烧杯大东西，然后把透析带一端扎紧，另一端开口绑紧在5ml枪头下端，扎紧得那端也能够弯过来绑成u字型。这样就能够用1ml的枪穿过5ml的枪头的孔，另一只手调整透析带，来加样取样，省去了总绑透析带的费事，对同一个蛋白许多屡次透析十分便利
25. 第一次发贴说一下自己的小经历，期望版主能给我一分，每次看到好东西由于没分都无法下，好羡慕有分的人啊。当然也不能坐收渔利，说一下自己的实验技巧给咱们同享。
1. 配SDS-PAGE胶时，用枪头混匀比较费事，并且费时吃力，作用也欠好。能够剪一小段夹文件的那种曲针做转子放到配胶的小烧杯里，在磁力搅拌器上边搅边参与各溶液，这样加完也就混匀了，直接灌胶即可。
2. 上面的站友也说过，上样用黄枪头就行，我也一贯在用，根柢不必注射器，便利的很，主张咱们也试试。
3.电泳后考马斯亮蓝染色一般要1h到2h，脱色也要2h左右，费事的很。现在给咱们说一个简略的办法，是我从一个师姐那里学到的。
参与染色液后，先放入微波炉里加热5-10秒，使染色液微热即可（千万不要加热太久，否则冰醋酸就蒸腾了）。然后放水平摇床上摇20分钟，最多半小时就染好了。
脱色也很简略，不必脱色液，直接用去离子水，放微波炉里煮沸5分钟左右，然后将水倒掉，再换上新的去离子水煮，这样重复几回，就能够了。作用或许比正常的脱色稍差一点点，不如那样清楚，只需电泳时比平常多上1/5的样品就能够了，要害是这样省时省材料（用不着含甲醇和冰醋酸的脱色液）。便利快捷！
26. 我也说说我的小经历。或许咱们都知道，请别笑线、配胶时必定要把握好时刻，不要由于过度赶时刻，而构成今后的条带粗大，压不成条带，且耗费许多试剂和时刻。
2、加样时，冲刷加样器可用双蒸水，用电泳液会使加样器中有许多的泡沫。或许是由于SDS的原因吧？
4、在跑样时一同参与MARKER有助于正确辨认所需的蛋白方位，削减NC膜的耗费。
6、做ECL显影时，依据荧光的亮度调整时刻。泡完显影液，胶片运用水洗一下，以削减定影液变黄。
7、和有经历的同学沟通，也是十分重要的。常识的沟通必定有助于实验的成功。
全部试剂运用手提质粒自己装备的溶液一、溶液二、溶液三（替代试剂盒的solution1、2、3），然后一比一的与饱满碘化钾或碘化钠（替代结合缓冲液）混合，就能够让质粒在硅胶上结合，而试剂盒的硅胶柱能够重复运用，没有试剂盒溶液量的约束，只需是相同的质粒我想提几管就提多少。
趁便说一句硅胶柱也能够用自己买的硅胶粉末替代，离心后倒掉硅胶柱上面的上清就能够，用起来不象柱子便利。作用比手提的要好要快。
28. 做WB时,样品比较多, 又怕放时刻长了对蛋白样品欠好,并且确认今后必定要做某个抗体,仅仅一时没有决议.那么你能够挑选先做SDS-PAGE,并转膜. 然后把PVDF膜凉干, 放四度保存. 今后拿出来关闭后,加抗体就行了. 蛋白在膜上,且现已别离, 比保存在BUFFER里边的蛋白必定更牢靠。呵呵
29. 今日作his纯化的时分，又琢磨了一个诀窍，与咱们同享。我得样品比较多，几百ml，而柱子不可大，只需10几ml，跑来跑去的上样，还总得记取，太费事了。所以，我就刷洁净了一个烧杯，装了我的样品，找了一个细胶皮管，当连通器，就像鱼缸换水相同，用5ml枪在一头一吸，液体流出来，放到纯化柱里，调好烧杯的方位，两个液面相同平了，呵呵，上了好几个小时了，没有问题，现在调低速度，过夜上样：）
首要便是30％的丙稀酰胺的装备。粉末状的丙稀酰胺和甲叉丙稀酰胺运用不该该超越一年，由于丙稀酰胺会吸潮水解，这样以来丙烯酸的含量就会加大，然后导致page胶不凝。
温度高时凝结快，可是亦不宜过高，由于温度改变会影响交连物的孔径巨细。所以温度在25度最为适宜。
1、向电泳玻璃板内参与胶条时，先在缝隙中参与配好的溴芬兰缓冲液，要加满，再将胶条贴后边玻璃板壁用薄塑料片将胶条慢慢推下至凝胶上缘，这样能够很好的防止胶条下构成空气泡。
2、能做出好的图谱现已很不简略了，假如在扫图时撕破真实惋惜，所以扫图要当心，将凝胶转移到扫描仪时能够用塑料隔片在下面托着，一同坚持有些水，这样就安全多了。
1、sds-page胶假如配好装好倒入内槽液今后，发现内槽液稍有渗漏，能够把外槽液多加一些，加满，加到与内槽液相齐，这样就能够持续正常跑胶，不必糟蹋现已加进去的内槽液
2、至于染色脱色的问题，咱们这儿一贯是染色：加热半分钟，摇20分钟；假如染液不是新配的，就加热半分钟摇十分钟，凉透了再重复一次即可
3、不知道咱们都是怎么做酶切的，我的领会是，酶切质粒时，两个酶别离单酶切比直接双酶切作用要好许多。我有一次双酶切两次都没连出来，后来分步单酶切，衔接功率简直100%。
能够第一个酶切完后直接把系统热失活，（依据酶阐明书上一般是65度20min）然后直接向里边补第二个酶
或许中心做一次收回，这个就要考虑收回功率和丢失的问题了，可是这样除蛋白最彻底
33. 俺也来说说关于Bradford法蛋白浓度定量和DTNB法巯基浓度定量的一点领会：
我是做蛋白润饰巯基后，经过这两种办法的定量来直接反响润饰的程度。一路探究过来，也有半年有余；最大的领会便是不要急于求成，直接实验，首要检测润饰系统是否对办法有影响，润饰基团是否会在595nm和412nm下有特定的吸收，润饰后润饰试剂本身是否会有改变，对蛋白全体结构构成影响，其次再谈详细润饰份额和程度。关于巯基浓度测定办法，有四种（Anal Biochem. 1998 Dec 1;265(1):8-14），而DTNB本身尽管灵敏度不高，可是重复性和抗干扰是最佳的了。
34. 考马斯亮蓝染色后的脱色，如在脱色液中加数张捏成条状的Kimwipes纸（国外实验室常用，恰当咱们的擦镜纸，全棉纤维制作），由于染料吸附到纸纤维上，脱色加快。待纸上色较深时，替换新纸条，不必换液。我想脱脂棉或纱布也是相同的。但滤纸等或许不可，会溶掉。
半贴壁细胞如SP/0或杂交瘤细胞传代时，不必吹打或刮落。先将上清吸出，恰当敲打培育瓶（当然是塑料瓶，玻璃瓶拍碎了别找我），即可见贴壁细胞掉落，加培育基混悬即可。留心，过力敲打培育瓶会裂，特别是瓶颈。
35. 一贯电泳时，盐离子简略聚在胶槽的两边．剪一小段ＩＰＧ胶条放在两边，构成盐桥，电压就简略上去了．防止一贯电泳欠好影响最终实验成果．
1、关于20021108战友的说法，我觉得咱们制备好了一批感受态，最好立刻转化一种已知质粒，与此一同，取一点感受态接种到含抗性的固/液体培育基培育来做对照。这样第二天即能够知道这批感受态是否还有外源质粒，又能够知道这批感受态转化功率的凹凸。假如合格，那今后就能够放心运用！由于我也从前遇到其实是由于感受态欠好而导致实验不成功，可是其时不知道，成果费时吃力。
2、做克隆挑斑时，咱们能够在将沾有菌体的牙签丢到试管前，在一块相应抗性的平板上点一下，标示清楚，培育时刻稍长一点，待长成较大菌落后收取。今后需求哪一个菌,就在平板上挑取。这样既便利快捷，又能够确保菌的共同。
3、抽提质粒时，参与Sloution II和III后要求轻柔混匀。我个人觉得不必这样，只需不是十分剧烈，能够快速混匀。特别能够运用在一次抽提多管质粒的时分，这样能够快速，并且作用一点也不差。
4、抽提质粒时，用无水乙醇沉积的时刻能够由实验操作者来决议，假如时刻富余能够30min，否则8-10min也能够。至于温度，个人觉得-20度好于常温。假如参与可醋酸钠，会较简略构成盐类杂质，所以时刻短一些更好！
今日想到这些，先写到这儿，今后想到了在上来与咱们同享。期望我的小经历对咱们有所协助！
37. 首要声明：实验中的一些技巧要用在首要对底子的操作有深入了解的基础上，在力求省时、省力、节省本钱等的一同，实验的精确性是最重要的。
对大多数做蛋白的战友们来说，培育细胞应该是不生疏的，我这儿谈一个培育细胞的小技巧，咱们知道，关于必定的空间（如某种尺度的细胞培育瓶）来说，细胞数目太多或许太少都不利于其成长，太多了就要消化，太少了要换一个小点儿的培育瓶，我的做法是：假如细胞数目太少，能够不必去找小一点儿的培育瓶，可把本来的培育瓶由本来的平放改为竖着放，这样底部的空间就小了，有利于细胞的成长，当细胞数目添加到必定程度的时分还能够在平过来，防止了来回换培育瓶而添加污染的时机（对没有小培育瓶的更有用）。
2、高电压/高电流电泳时，能够把电泳槽放到4度冰箱中进行电泳，省时省力，1hr搞定。
3、胶考染时刻40min，放在凝胶摇床上（没有胶床能够放到28度一般摇床上，但要操控好摇床速度）慢慢摇摆，使染色均匀，一同可进步检测的灵敏度，依据我的经历能够到达银染的等级，便是脱色时刻比较长，一般需求脱色2－3d，夏天的时分要勤换脱色液，防止变臭哦
39. 质粒小提假如是用作判定或酶切，不必进行酚仿抽提，将溶液1.2.3 离心后的清液移入一个新的1.5ml离心管中，再次离心3-5分钟，当心取出上清液后，直接沉积，不必忧虑DNA切不开，我现已这样运用一年多，没出过什么问题。当然这样的质粒不很洁净，可是做判定满足了。特别是实验室女同胞们，能够削减酚仿的损害，并且节省时刻。
咱们平常做实验，必定都有许多小的技巧，在书上都看不到的，也没有系统的收拾，可是的确能够起到很好的作用，无妨在这儿与咱们同享一下。
我在用酶标板加样的时分，蛋白样品常常会发生许多气泡，假如做荧光实验，由于灵敏度十分高，一点点细小的气泡都会影响很大，常常又不或许加消泡剂，我就用卫生纸，撕下来一下条，搓成小针，碰一碰气泡就破了，很好使：）
1、酶切或许PCR系统混合好今后，咱们都会用手指轻弹EP管的底部来混匀溶液，常常呈现许多气泡。这时分轻弹液面上方的管壁，消除气泡就垂手可得了。千万别弹液面下方的，气泡会越来越多。
3、用卫生纸是一个，我觉得最好的是用接种针烧热了之后去戳一下，防止被卫生纸污染哈
主张瞬间离心一下是最好的，不光消除气泡，还有将管壁上的液体离下来，否则或许不可分装
4、卫生纸首要成分是纤维素，一般并不会污染样品，除非你做剖析实验，之所以用卫生纸是由于它会吸水，削减水的外表张力，很简略就让气泡破裂了
5、磁珠收回时，不要贪多，搜集上层即可，过分影响DNA的纯度和质量，对链接、转化有印象。
6、各种buffer都要彻底消融后才干用，并且不管什么药品，假如只剩下最终一点根柢了，最好抛弃，由于或许会影响你的实验
8、做前必定要在笔记上写上1、2、3.....，在依照笔记一步一步做，否则简略犯错。
9、要加的酶阿，dNTP，水啊之类的能分装的话最好分装好一点，假如污染的线、实验前,列个表单,列明要害点.防止犯错.这样费一点时刻是值得的.不要太信任自己的回忆.
孤风逐日：任何试剂重复冻融对其功率都有很大地影响。所以买来的试剂第一次运用时要留心按每次实验用量分装保存。提取的模板或纯化的样品也最好分装保存，以备意外。
许多个人经历在个板块相关剖析中都有一些提及，只需多加留心就能够学到许多高手的不传经历。
1. 假如用同一对引物扩不同的模板，能够先依照事前确认的份额，依照n+2的量把水，反响缓冲液，dNTP，镁盐，引物和Tag酶先加到一个大管里边，混匀后便是“预混合液”了，然后把“预混合液”分装到做PCR用的小管里边，一般我会分装n+1管，最终向前n管里边入模板，混匀，最终一管不加模板而是参与和模板等量的无菌水，作为对照，以查看加样过程中是否引入了污染，接下来就能够进行PCR反响。
2.假如用不同的引物扩同一模板（不做多重PCR），则将第1点的引物和模板次第互换即可。
3.同理，假如用不同的引物别离扩不同的模板，则将引物和模板留在最终分装后再别离参与。
这样做的长处：能够许多削减取样次数，削减了不同PCR管之间的差错（这一点关于荧光定量PCR特别重要）；节省时刻。
缺陷：假如在制备预混合液时的任何一步引入了污染则会导致这一批次的全部PCR反响都被污染，所以我每次都做一个阴性对照（用无菌水替换模板），以检测是否被污染。
12、假如遇到实验有许多步，仅仅自己看protocol做，没有人带并且是第一次，我主张确立好过程，然后每做一步的时分只重视眼前这一步，仔细的做，不犯错。这样每一步都仅仅关怀眼下，能够集中精力，并且每一步都确保无误，最终成果应该不会太坏，并且即便出了问题，能够扫除操作的要素。
其实是我自己的亲自领会，咱们都知道假如严厉依照protocol上的去做不光糟蹋药品，也糟蹋时刻，程序还繁琐，当然价值也高些。
1、假如你跑的是小板的（SSR之类的剖析满足），那么先找来4个1升左右的空塑料瓶，洗洁净（我用的是上海国药的装尿素瓶，带盖的），用来别离装银染要用的固定液、染色液（硝酸银）、显影液、纯水，在每个上面别离写上姓名，避免弄错，每次收回这些溶液后，把盖子拧紧，以阻挠一些蒸腾或分化吧，延伸运用“寿数”。
2、一般的书上都说显影液只能用一次，其实彻底不至，我一般都是至少用2次，根柢一点问题都没有。还有固定液和染色液也能够恰当多用几回，只需能然出来就行。
3、有的时分实验室用超纯水so多，也so糟蹋，或是一时半会制不出来，而染色要用怎么办呢，我无意中就用蒸馏水替代，什么问题都没有，根柢没啥不同，乃至于后来我压根都不必蒸馏水了，爽性改自来水，也没啥问题，彻底可行，不信咱们能够试试，呵呵，尽管说是或许某些当地不是很合理，但对一般像做分子符号之类的根柢没啥影响，替老板能省就省点吧，咱们都不简略，哈哈!
还有我忘了说了，从前常常跑完胶后来不及染色就得回睡房了，怎么办呢，不必熬夜，就把胶剥离下来泡在固定液里，第二天早上再来接着下面的过程一点问题都没有，便是或许胶尺度会有些改变，但必定不影响你的成果。
最终一个便是读带问题，我见过他人许多种办法，但我自己“创造”了一种有用、精确的：
找一块大点的一般玻璃板(我其时用的是跑大笔直板胶的），带上手套（保护好自己，尽管聚合后毒性小，但仍是有的），快速把胶捞出来，放在玻璃板上，再敏捷把玻璃翻个面，平放在观片灯上，只需你速度快，胶是不会掉下来的，会紧紧贴在玻璃上的，最好玻璃板和管片灯的平面有点空地，否则胶粘住观片灯外表就会把灯面弄脏，胶也或许会掉，全部弄好后，你就能够直接那笔在玻璃的这个洁净面上一览无余的读带，直接能够往上面写带型，然后为了今后查看用，最好用数码相机快速摄影保存，不光胶上的带能够看清，你在玻璃上写的带型数字也是十分清楚的，当然读完的胶就能够当即丢掉，没必要保存
14、做实验时，仔细做好记载，写好实验成果，过一段时刻再去看看，温故而知新
15、有些时分做完ＰＣＲ，由于条带很淡，但你想收回．无妨将有意图条带的胶切下来．放到－２０度冻一会，拿出吸它的液体作摸板，再扩增作用很好！！
16、做转染，我养过四五种细胞，都做了转染，但每种的转染率都不相同，自己其时就吃了这个亏，提示咱们，谁做转染事前先查一下要转的细胞转然率怎么样。
还有便是我在用脂质体2000做转染时，一次发现转染6小时后的液体打到其他细胞里仍能够转进去，所以为了进步转染率，我今后在6小时的时分都没有把转染液体打出去，仅仅又加了含血清的培育基。
但有一个问题便是，不打出去的话，细胞会死许多，这个也与养的细胞品种，状况都有关。
17 PCR预混:预混一般依据样品的多少，一般我在预混的时分大约每个样品管中估计丢失0。5－0。6微升，这样核算需求的总的预混液数量，比较适宜。
18、做实验前 必定先写出过程和列出实验所需求的试剂和器件，下面看看哪些是要购买的，哪些是需求清洗的，哪些是要前处理的如过滤、高压。
定试剂必定要打提前量，欠好买的试剂必定要在3周左右前订购，如在SIGMA订购。
例如tip头吸完后立刻从移液器上取下来，避免忙乱的时分又以同一tip罗致另一种试剂
一个枪头假如能够接连吸两次的话，也不能吸，首要是第2次吸时禁绝，一同也不能彻底打出来。
做完实验擦干桌子，全部东西归位，有些东西能够收回的就收回，许多实验室的枪头是收回的
实验前仔细规划，作实验时不想入非非，叽叽喳喳，做完后在放言高论，仔细剖析实验数据
做之前仔细规划,做时就不要老是想着成果,平心静气,留心细节，仔细记载，由于失利是常事，不要回过头不知道该从哪里找原因。
每次的实验完毕，要及时做好记载，不要等。好记忆不如烂笔头，这尽管是俗话，可是不要抛弃笔的重要性！
做完实验，整理实验台，以便下次能够更快、更好，更便利的持续作业！药品归位，仪器归位！
做实验必定要有方案,最好在有部分实验数据出来时,就着手写文章,这个不是为了出文章,而是在写文章的时分,能够明晰自己的思路,知道后边该先做什么,该要点做什么.否则有时分辛苦半死,数据太涣散,不能阐明问题.
不轻易用他人的东西，用时先打招待，记载要详细，配液体时要记载试剂的批号等?
实验之前看材料的时分，最好规类寄存，看过后记下要点内容，并将出处标明，避免日后找不到
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